Linked immunosorbent assay (ELISA)

Linked immunosorbent assay (ELISA)

În prezent, ELISA se utilizează în următoarele situații:

1) Căutarea de anticorpi specifici pentru orice infecție zabolevaniyu-
2) caută antigenele oricăror boli (boli infecțioase, venerice) -
3) studiul patsienta- statusul hormonal
4) screening-ul pentru onkomarkery-
5) testarea pentru prezența bolilor autoimune.

Avantajele ELISA:

1) de înaltă specificitate și sensibilitate ELISA (peste 90%).
2) Capacitatea de a determina și monitoriza dinamica procesului de boală, adică comparând cantitatea de anticorpi la diferite intervale de timp.
3) ELISA disponibilitatea de diagnosticare la orice instituție medicală.

Lipsa relativă de:

1) Detectarea unui răspuns imun (anticorpi), dar nu și a agentului patogen.

concepte de bază

Înainte să clarifice esența metodei ELISA, pe scurt să înțeleagă unele concepte.
Anticorpii (sau imunoglobuline - Ig) - proteine ​​specifice produse de B -
limfocite (celule ale sistemului imunitar), ca răspuns la intrarea în corpul unui agent patogen infecțios (virus, bacterii, fungi, etc.). Imunoglobulina A secreta (IgA), imunoglobulina E (IgE), imunoglobulina M (IgM), imunoglobulina G (IgG), imunoglobulina D (IgD). Acestea diferă unul de altul și formează o masă timp de înjumătățire de participare / neparticipare moleculara in procesele infectioase, detecta momentul din momentul infecției. Dacă luăm în considerare greutatea moleculară, cel mai mult el IgM - este un pentamer (950.000 Da), în contrast cu restul Ig (150 - 200 000 Da), astfel încât IgM pur și simplu nu poate trece prin bariera placentară. Prin urmare, detectarea IgM la un copil de 1 an de viață este întotdeauna un semn de infecție la făt. Cea mai mare parte a imunoglobulinelor serice este reprezentat de IgG (75-85%), iar cel mai mic - IgE (0,003%). Procesul infecțios implicat în mod direct a lua numai IgA, M, G. IgE sunt un semn al reacțiilor și stărilor alergice și IgD - poate fi detectată doar în nodul limfatic si tesutul amigdalelor, joaca un rol in formarea imunității locale.

clase de imunoglobuline

antigeni - substanțe organice cu greutate moleculară mare, în special agenți patogeni infecțioși și a altor boli, precum și diferite substanțe modificate celule produse într-o anumită boală (boli autoimune, cancer).

complex imun - un anticorp-antigen implicate in procesul imunitar.

Pe ce este metoda ELISA.

Există mai multe varietăți de ELISA (directe, indirecte, blocarea Competitori metodei), dar în practică cel mai frecvent utilizate imunoenzimatică eterogene sau ELISA (enzimă legată testul immunosorbent)

Baza imunoanalizei răspunsului imun al unui antigen și un anticorp pentru a forma un complex imun: antigen-anticorp, care a avut ca rezultat o schimbare a activității enzimatice a mărcilor specifice pe suprafața de anticorp.

Esența metodei ELISA

În termeni simpli, acest proces poate fi împărțit în mai multe etape:

1) Pe suprafața plăcii doctor gaura, examinatorul este purificat patogen specific antigen. La adăugarea materialului biologic (serul sanguin) unei reacții specifice pacientului are loc între antigen și anticorpul dorit (imunoglobuline). Această conexiune va acționa ca un „antigen special“ în etapa următoare.

2) În această etapă este IR formarea (complexe imune) - reacția dintre „antigenul specific“ și conjugat (această imunoglobulina marcată cu enzima peroxidaza). Adăugat cromogen speciale. Rezultatul acestei reacții enzimatice este formarea de substanțe colorate în godeurile plăcii, din care intensitatea culorii depinde de numărul de imunoglobuline (anticorpi) pacient conținute în material.

3) în plus există Interpretare: fotometrie folosind un spectrofotometru multicanal comparând densitatea optică a materialului de testat, cu o densitate optică de probe de control, rezultate de prelucrare matematică. Cantitatea de anticorpi la pacient depinde de înălțimea densității optice a sondelor.

De obicei, în practică, utilizarea de plăci cu 96 godeuri.

Când măsurătorile de densitate optică (OD) volumul eșantionului calculat lichid (sau concentrația) anticorpilor specifici într-un volum unitate. Rezultatul este apoi comparat cu o probă de control.

Trebuie amintit:pentru fiecare sistem de testare dezvoltat pentru a lua în considerare rezultatele individuale de performanță, standardele de performanță și a patologiei (de exemplu, „valoare de referință“). Acest lucru ar trebui să fie luate în considerare atunci când se evaluează rezultatele fiecărui studiu de caz. Interpreta corect rezultatele unui laborator de „valori de referință“ un alt laborator. De asemenea, este incorect să se compare rezultatele de la diferite laboratoare împreună.

La setarea reacțiilor ELISA și are o valoare, cum ar fi conceptul aviditate de anticorp.
anticorpi aviditate - o forță de legătură a anticorpului la un antigen și cantitatea de antigen situat în interrelație cu immnoglobulinami (anticorpi). Aviditate este de mare importanță atunci când se evaluează presupusa infectarea a termenului, care este extrem de important în diagnosticul infecției primare la femeile gravide.

Baza anticorp test de aviditate cuprinde tratarea complexe imune (antigen-anticorp), soluție de uree, în scopul de a distruge proteine. Link-uri Vysokoavidnye rămân intacte, și aviditate scăzută distruse. Rezultatul este dat ca indicele de aviditate, exprimat ca procent (%).

Ce boli sunt detectate prin ELISA-diagnosticare?

1. Boli infecțioase
1.1 Hepatita virală A (IgM, G), B antigenii HBsAg, AgHBe, anticorpi - IgM HBcorAg, Ig totală HBcorAg, IgG AgHBe), C (anticorpi Ig M, G HCV), D (IgM, G), E (Ig M, G) și altele.
1.2 infecției cu HIV (IgG)
1.3 citomegalovirus infecție (anticorpi IgM, G)
1.4 Epstein-Barr infecție sau mononkleoz (IgM anticorp, G la EA, proteine ​​virale VCA, NA)
1.5 infecție herpetic (anticorpi IgM, G)
1.6 Toxoplasmoza (anticorpi IgM, G)
1.7 Rubeola (IgM, G)
1.8 pojar (IgM, G), bruceloza (IgM, G), pseudotuberculosis (IgM, G), salmoneloză (IgM, G), shigelloză sau dizenterie (IgM, G), aspergiloza (IgM, G), encefalită de căpușe, Borelioza și multe altele.
1.9 parazitoze (giardiaza, toxocarioza, trichineloză, opistorhoz, echinococoza, alveococcosis și altele), în care IgG detectată
1.10 (boli cu transmitere sexuală prin) STD - micoplasmoze (IgM, G), Ureaplasmosis (IgM, G), Chlamydia (IgA, M, G), Sifilis (IgG)
1.11 infecția cu Helicobacter (IgG)

2. Markerii de boli autoimune și indicatorii sistemului imunitar uman (Total IgE, IgG total, total de IgA, IgM total, de IgD, IgA secretorie, IgG 2, IgG4, CRC complexelor imune circulante, anticorpi IgA și IgG la gliadina și altele)

3. Markerii Onkologichsekie (TNF - factorul de necroză tumorală, CEA - antigenul carcinoembrionar, PSA - antigenul specific de prostată, hCG - human chorionic gonadotropin, CA 125, alveomutsin și multe altele)

4. Tulburările reproductiveI (estradiol, progesteron, prolactina, testosteronul, AFP AFP-, FSH - hormon foliculostimulant, și altele)

5. Boli tiroidiene (Gratuit și T3 legat, T4, tiroglobulină, peroxidază tiroidă - TPO, hormon stimulator tiroidian - TTG).

Această listă este în nici un caz toate bolile sunt diagnosticate prin ELISA.

Materialul pentru analiza ELISA si regula gardul

Cel mai frecvent material pentru reacția IFA - serul unui pacient, luată pe stomacul gol. Materialul poate servi ca lichid cefalorahidian, lichid amniotic, continutul vitroase, mucus al canalului și uretrei cervicale tampoanelor.

Pregătirea pacienților pentru livrarea de materiale pentru IFA

Sângele este luat pe stomacul gol. Inainte de livrare de sânge nu trebuie să luați medicamente. Un tratament specific (antibacterian, antiviral, antiparazitar și așa mai departe) trebuie oprită cu cel puțin 2 săptămâni înainte de studiu.

IFA termeni de fabricație

Material immunosorbent assay este ținut rapid în timpul zilei. Întârzierile pot fi în diferite laboratoare din cauza acumulării unei anumite cantități de seruri.

Rezultate posibile ale ELISA de diagnosticare

La evaluarea rezultatelor infecțiilor specifice este importantă clasă de anticorpi identificați și numărul acestora. Ea afectează nu numai problema etiologia infecției (adică sau nu), dar etapa estimată a bolii (acute și cronice), precum și prezența unei infecții active (acute sau exacerbarea cronice) la momentul studiului.

Care sunt calendarul aproximativ de anticorpi (imunoglobuline - Ig)?

Cele mai timpurii anticorpi IgM sunt. Ele pot identifica prin 1-3 saptamani dupa posibile infectii care caracterizează faza acută a infecției. A doua situație este apariția anticorpilor IgM - activarea (sau exacerbarea) proces cronic. Anticorpii IgM circula o medie de aproximativ 3 luni, atunci numărul lor dispare treptat. Cu toate acestea, la unii pacienți, cantități infime de IgM pot fi detectate în termen de 1-2 ani de la infectare.

Sistemele moderne de testare sunt extrem de sensibile, astfel încât există rezultate fals pozitive nespecifice (de multe ori la femeile gravide). Prin urmare, un IgM pozitiv în acest grup de pacienți ar trebui să fie reverificate!

anticorpii IgA apar 2-4 săptămâni după infectare, dar într-o cantitate suficientă pentru a detecta - o lună. IgA din ser sintetizat de celulele plasmatice ale splinei, ganglionilor limfatici si IgA secretori mucoaselor concentrat asupra membranelor mucoase pentru a îndeplini funcția de protecție - implicate în imunitatea locală.

Pe post-infecție săptămâna a 4-a începe să apară anticorpii IgG. In cele mai multe infecții titrului crește treptat, cu un maxim la momente diferite (o medie de 1,5-2 luni), apoi titrul a rămas la un nivel scăzut și indică imunitate. In unele boli (micoplasmoze, chlamydia, trihomoniaza) nivelul IgG nu este mare, este redus semnificativ datorită lipsei de imunitate la aceste infecții.

detectare materializări a anticorpilor din diferite clase:

- Izolat detectarea anticorpilor IgM implică existența unui primar
infecție.
- detectare simultană a IgM și IgG de sânge tipic pentru infecția primară
în ultimele 2-3 luni, precum și agravarea bolilor cronice. Prin urmare, prezența IgM în timpul sarcinii nu este întotdeauna o indicație a infecției inițiale.
- Detectarea IgG izolat și poate indica o imunitate la boala,
și infecția cronică. În a doua situație este stabilită și cantitatea de anticorpi (titru) și modificarea dinamicii titrului. De obicei, studiile au fost efectuate cu un interval de 2-4-6 săptămâni.
- Detectarea IgA sau IgM izolat indică o infecție primară. la
împreună cu apariția de IgA IgG presupus activarea unei infecții cronice (medie de 2 săptămâni de la momentul exacerbare).

definiție aviditate anticorpi IgG este completarea perfectă pentru diagnosticul infecției cu stadiul primar al infecției de lungă durată, care are semnificația sa clinică, în special atunci când se evaluează riscul de infecție intrauterină a fătului. Detectarea IgG aviditate scăzută indică o infecție primară și identifică media după 4-6 luni de la infectare, rareori mai mult. Low aviditate IgG necesită altor probe de laborator de infecție primară (IgM). Anticorpii aviditate ridicată sunt fie un semn de boli cronice si acute sau imunitate formate.

Mai ales la sugari:la copii sub un an, și, uneori, chiar și 1,5 ani în sânge circulant anticorpii materni IgG la diferite infecții (de exemplu, a existat penetrarea lor prin placenta de la mama la fat in uter). Acesta nu este, în sine, un semn al prezenței infecției în prezent. Dacă la vârsta de takjm detectate IgM (amintesc că IgM materne traversează placenta nu poate), acesta este un semn de infecție sau de infecție intrauterină dobândită după naștere.

Metoda ELISA cantitativă

Rezultate diagnosticare ELISA (folosind analizorul imunoenzimatică) se eliberează în unități specifice:
- Densitatea optică (DO) a probei - concentrația de anticorp specific pe unitatea de volum. Cu cât diametrul exterior al eșantionului, cu cât concentrația de anticorpi. Unele rezultate sugereaza factor de pozitivitate (CP) - este, de asemenea, densitatea optică a probei.
- Unități de concentrație de anticorp (ng / ml sau ng / ml).
- Într-un titru seric: 1:20, 1:40, 1: 100, 1: 200, 1: 400, 1: 800, 1: 1200 și așa mai departe. Titrurile de diagnosticare (la care este diagnosticată boala, mai degraba decat faptul de infectie) pentru diverse boli diferite.
- In forma simbolurilor - "+", "-" (+, ++, +++, ++++) "?".
- Într-o evaluare calitativă a unei valori criteriu (pozitiv sau negativ).

estima corect cantitatea de imunoglobuline varianta de anticorp de identificare clasă, și, în consecință, expune stadiul bolii și nevoia de numai un medic poate trata.

Nu trebuie să uităm că „valoarea de referință“ lor (exemple de realizare norma), și peste care o anumită boală diagnosticată (variante patologie), dezvoltat pentru orice sistem de testare. „Valorile de referință“ pentru sisteme de testare diferite diferite.

Corectați compararea rezultatelor ELISA, luate în timp, este posibilă numai în cazul producerii lor, în același laborator.