Diagnosticare PCR - analiza privind infecția

reacție în lanț a polimerazei (PCR) - precizie de diagnostic genetic molecular, care permite unei persoane să identifice diverse boli infecțioase și ereditare, stadiile atât acute, cât și cronice și bine înainte ca boala se poate manifesta.

reacție în lanț a polimerazei (PCR), în 1983 a dezvoltat un Myullis Cary (USA), pentru care în 1993 a primit Premiul Nobel pentru Chimie.

Analiza PCR pentru majoritatea infecțiilor devin un fel de „standard de aur“. Cei mai mulți profesioniști cu care se confruntă cu el aproape în fiecare zi și nu sunt fără un diagnostic definitiv. PCR este adesea singura reacție pentru detectarea stadii active în momentele când alții eșuează bacteriologice, virusologice și metode de diagnostic imunologice.

Avantajele diagnostic PCR în medicina modernă:

• Detectarea directă a prezenței agentului patogen (adică, o porțiune specifică a ADN-ului sau ARN al agentului patogen) în eșantion.
• înaltă specificitate vă permite să definiți o porțiune unică a ADN-ului sau ARN-ului caracteristic unui anumit agent patogen, care elimină posibilitatea de rezultate fals pozitive.
• Sensibilitatea ridicată a metodei PCR poate detecta chiar si celule unice de agenți patogeni (virusuri, bacterii). Sensibilitatea PCR este 10-1000 în celula de probă (de exemplu, sensibilitatea testelor imunologice și microscopice - numai 103-105 celule).
• Dezvoltarea unei tehnici universale PCR pentru detectarea diferitelor patogeni. Obiectul de studiu pentru PCR este materialul genetic (ADN, ARN) al agentului patogen. Metoda permite identificarea mai multor agenți patogeni dintr-o probă biologică.
• Rezultatele produce rapid analize suficient. O anchetă completă se efectuează timp de 4-4,5 ore, cel puțin - un pic mai mult.
• Abilitatea de a detecta agenți patogeni ai simptomelor bolii (diagnosticare preclinice) si boala apoi transmis (diagnostic retrospectiv). Un exemplu de diagnostic preclinice vor fi examinate în perioada de incubație (de la momentul infecției la apariția plângerilor pacientului), precum și infecția latentă (atunci când nici un simptom, dar numai date de laborator - PCR, de exemplu). Unul dintre cele mai importante de diagnostic PCR realizează PCR în materialul de arhivă sau a reziduurilor biologice, ceea ce este important pentru identificare sau paternitate.

În prezent, diagnosticul PCR suferă o dezvoltare semnificativă. Mergând îmbunătățirea metodei, timpul și din nou, există noi soiuri de PCR, piața medicală primește noul sistem de testare pentru această reacție. Astfel, costul analizei este de a deveni mai accesibilă pentru o gamă largă de pacienți în fiecare an.

Care este baza metodei PCR

Baza pentru reacția în lanț a polimerazei se repetă de dublare (amplificare) a unei anumite porțiuni de ADN sau ARN cu ajutorul enzimelor in vitro. Rezultatul este cantitatea de ADN sau ARN suficient pentru analiza vizuală. Studiul este copiat numai porțiunea care se potrivește în condițiile date, și numai într-o situație de prezența sa în proba de testare.

De exemplu, materialul pentru studiu, suspectat de a conține fragmentele de ADN sau ARN ale patogenului (salivă, sânge, urină, secreții genitale) este plasat într-un reactor special (cycler termic). În plus la acestea se adaugă enzime specifice care se leaga de agentului patogen ADN sau ARN și sinteza copia acestuia. Ea vine în mai multe etape de tip „reacție în lanț“, iar în cele din urmă de o copie a materialului genetic poate fi format și sute de mii de exemplare. Apoi vine analiza și compararea rezultatelor cu baza de date disponibile despre structura diferitelor agenți patogeni. Prin PCR este posibilă nu numai pentru a identifica tipul de agent patogen, dar, de asemenea, pentru a da un rezultat cantitativ al analizei, care este, cât de mulți agenți patogeni în corpul uman.

PCR este în prezent extinderea cercului posibilităților de cercetare în introducerea de mutații, despicare a fragmentelor de ADN, și utilizate pe scară largă în medicină, de exemplu, stabilirea paternității, apariția unor noi gene și așa mai departe.

Ce infecție poate fi detectată prin diagnosticare PCR

1) infecției cu HIV (poate detecta virusul imunodeficienței umane HIV-1)
2) Hepatita virală A, B, C, G (ARN-HAV, ADN-VHB, ARN-VHC, ARN-HGV)
3) mononucleoza infecțioasă (Epstein-Barr DNA -VEB)
4) Citomegalovirus (ADN-CMV)
5) infecție Herpes (ADN virus herpes simplex HSV tip 1 și 2)
Infecții 6) ITS (cu transmitere sexuală prin) - ureaplasmosis, vaginita bacteriana, Chlamydia, micoplasmoze, trichomoniaza,
7) tuberculoza (mycobacterium tuberculosis)
8) Oncogene Virusurile - infecția cu virusul papiloma (virusul papiloma uman (inclusiv sale tipuri oncogene 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58 și 59)
9) borelioza, encefalita căpușe
10) Listerioza
11) Candida (fungi Candida genus)
12) infecția cu Helicobacter (Helicobacter pylori)
și alte

Având în vedere gama de agenti patogeni, diagnosticare PCR este utilizat pe scară largă în practica ginecologice, urologice, practica, boli infecțioase, pneumologie, TB, gastroenterologie, hematologie, oncologie si altele.

Material pentru studiu și regulile de gard

Materialul pentru analiza PCR, care poate identifica ADN-ul străin de o bacterie sau un virus ADN sau ARN poate servi mediu biologic diferit si fluide umane: mucus, urină, sânge, spută, răzuire epiteliale celule, țesuturi, placenta, sânge, suc de prostată, lichidul amniotic, lichidul pleural.

Atunci când screening-ul pentru infectiile cu transmitere sexuala (ITS) în rândul bărbaților și femeilor sunt luate de organele genitale, un frotiu sau racla de frotiu cervical sau racla din uretra (uretra), urina.

Când screening pentru infecție (infecție cu herpes, infecție cu CMV, mononucleoză, toxoplasmoza, hepatita B și C, HIV) PCR retrage din sânge.

Pentru diagnosticul mononucleozei infecțioase, infecții cu citomegalovirus, herpes infecție gât tampon este luat pentru screening-ul pentru CMV - urina. De multe ori, pentru ancheta privind leziuni ale sistemului nervos într-o serie de studii luate de lichid cefalorahidian.

In materialul pneumologie este spută, fluid pleural.

Atunci când screening-ul pentru infectiile fetale - lichid amniotic, țesuturile placentare.

Mod de preparare pentru livrarea materialului și care efectuează diagnostice PCR

Aproape toți pacienții care au suferit diagnostice PCR, se poate conta pe un rezultate fiabile, precise și rapide, care depinde în mare măsură de posibilitatea de laborator, medicii de laborator profesionale. În același timp, mulți nu-și dau seama că cel mai de încredere depinde în mare măsură de noi înșine, și anume, pe recomandările medicului curant, stilul de viață, și corectitudinea materialului gard. Atunci când materialul de gard condițiile cerute excluderea contaminării (poluării) a materialului și, prin urmare, sub semnul întrebării obiectivitatea analizei.

Pregătirea adecvată pentru livrarea materialului nu prezintă nici o dificultate. Recomandări Următoarele medicilor pentru pacienți:

1) să nu aibă contact sexual cu o zi înainte datei materiala-
2) sânge pentru cercetare tratate în dimineața pe stomacul gol (nu mânca, bea) -
3) La momentul în care prima urină de dimineață merge parte într-un recipient steril curat.

Perioada de pregătire PCR

Rezultatul final este gata în 1,5-2 zile de la livrare a materialului. În unele cazuri, rezultatul este pregătit pentru prima zi.

Decriptarea rezultatelor PCR

negativ Rezultatul PCR indică faptul că materialul de testat la momentul livrării nu au găsit urme ale agenților infecțioși. Cele mai multe dintre cazuri arată o lipsă de infecție, care încearcă să găsească în proba de testare.

pozitiv Rezultatul PCR indică detectarea urmelor de infecție în proba biologică de testare. Cu mare precizie rezultat pozitiv indică prezența infecției într-un timp dat.

Există situații în care PCR este pozitiv, dar de infecție activă nu se poate vorbi - așa-numitul „purtător sănătos“, fără simptome clinice ale bolii, care nu necesită tratament, dar necesită o monitorizare dinamică de către un medic. Ea apare mai des într-un număr de infecții virale (HPV, CMV, infecție cu EBV, infecție cu herpes, și altele), în materiale, cum ar fi saliva, decopertarea colului uterin, uretra, care este, din punctul central local. Cu toate acestea, nu trebuie să uităm că transmiterea infecției de la purtători sănătoși la oameni pot, ca o tranziție la forma cronică a bolii cu procesul de activare. Dacă PCR este pozitiv în sânge, atunci este nici un operator de transport și necesită un tratament specific.

PCR cantitativ este evaluat de către un medic în mod individual pentru o anumită infecție separat și nu are gradații comune. Pe baza rezultatului medic PCR cantitativ poate determina nivelul de activitate al infecției și expune stadiul bolii, care afectează cu siguranță cursul și medicamentele cu doze prescrise.

Una dintre ultimele probleme de interes: cât de exacte diagnostic PCR?

3 există o definiție pentru analiza PCR:

1. Precizie (cu mare probabilitate poate identifica sau absența infecției).
2. specificitatea (acuratețea detectării unei anumite infecție).
3. Sensibilitate (chiar la niveluri scăzute de agenți patogeni material genetic în probă este detectată infecție).

reacția de polimerizare în lanț este aproape nu dă rezultate fals pozitive (adică, nu există probe pozitive în care infecția este absentă). Rezultate fals negative sunt rare (cele mai multe ori acest lucru se datorează lipsei unei infecții la om activ in acest moment). De exemplu, infecții latente, infecție cronică este activă.